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本品是通过液氮点液冻干技术制备的即用型逆转录-恒温扩增试剂盒，含有除引物和模板外的所有组分。用户仅需加入RNA模板、引物、Mg²⁺和水，即可在37～42℃恒温下快速完成RNA逆转录与cDNA扩增。

• 核酸内切酶活性：将1粒Lyophilized RT Iso-amplification Mix溶于25μL ddH2O，再与200ng超螺旋质粒DNA在37℃共同温育4h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
  
• RNase活性：将1粒Lyophilized RT Iso-amplification Mix溶于25μL ddH2O，再与500ng总RNA在37℃温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。

• 扩增产物的气溶胶易造成假阳性，为避免交叉污染，建议有条件的用户在基因扩增实验室内操作，加样与扩增在不同区域进行。
  
• 实验时应设置不加模板的空白对照（建议使用开盖无菌水），以确认是否有待扩增核酸的污染。
  
• 反应体系中包含大量DNA结合蛋白，产物直接电泳会出现严重拖带，建议将产物纯化后再进行电泳检测。

• 按下表配制反应体系：
  

  试剂	使用量	终浓度
  Lyophilized RT Iso-amplification Mix	1粒
  RNA模板	5μL
  正向引物(10μM)	1μL	0.4μM
  反向引物(10μM)	1μL	0.4μM
  ddH2O	至23.7μL

  • 引物长度建议为30～35nt，内部尽量避免二级结构和连续单碱基重复序列，引物Tm不作考虑。扩增目标片段长度建议为200～500bp。
• 待微球完全溶解后，在反应管盖上滴加1.3μL Mg(OAc)2 (280mM)。小心盖紧管盖，上下颠倒5次，瞬时离心收集至管底。
  
• 迅速将反应管放入预热好的恒温设备中，在37～42℃（建议40℃）下恒温反应20～30min。
  
• 反应结束将产物纯化，然后使用琼脂糖凝胶电泳检测。